Y染色体微缺失检测试剂盒

[产品名称]

Y染色体微缺失检测试剂盒（Y6）

[规格] 20次测试/盒

[检测原理]
Y染色体上存在影响精子发生的无精子因子（AZF）座位缺失，是男性原发性不育的一个重要遗传因素。AZF基因家族有AZFa、AZFb、AZFc三个区域，其中任何一个区域的微缺失都能导致精子生成障碍。Y染色体微缺失分子诊断实验利用多重聚合酶链反应（multiplex－PCR）特异性扩增Y染色体AZF区域的序列标签位点（STS），每个区域设置2个STS位点，AZFa：sY84，sY86；AZFb: sY127，sY134；AZFc：sY254，sY255；以SRY作为内参对照。扩增产物用电泳或杂交等方法进行检测。

[试剂组份]

[储存条件及有效期]

试剂盒保存条件：-20度保存。试剂盒有效期为6个月。试剂盒使用时应尽量减少冻融次数。

[样本要求]适用样本：外周静脉血、口腔上皮、精子和生殖腺活检标本等。本试剂未配有DNA提取试剂，本试剂检测所需DNA模板量为40ng~150ng，建议根据检测需要量以及DNA提取试剂盒说明书要求，取足量样本用于DNA提取。标本DNA模板提取正常情况下，A260/280的比值应在1.8~2.0之间。

[试验过程]

1.取出试剂盒各组分，室温溶解。根据当次实验所进行的反应次书计算，反应数指标本检验数量加上1个空白对照，1个正常对照、1个阴性对照，剩余的试剂放回-20度避光保存。

2.按照以下反应体系：

I反应：检测的STS位点SY84、SY127、SY255

II反应：检测的STS位点SY254、SY134、SY86

模板DNA是指：标本DNA、阴性对照、正常对照、空白对照

备注：PCR反应中不能加入loading buffer。

 3.反应条件

4. PCR扩增后检测

PCR扩增产物最常见的检测方法是琼脂糖凝胶电泳。PCR产物加入loading buffer 4ul。然后琼脂糖凝胶电泳。由于每个泳道有4条扩增产物，其分子量相差太小，电泳时间将可相应的延长，但是电泳时间控制在1时以内比较合适。推荐：取PCR反应产物10ul进行琼脂糖凝胶电泳，琼脂糖浓度3%，电压选择8V/cm，电泳时间45~60min。

5. 实验结果的判断与优化

扩增条带辨别示意图：

所有男性标本中都应扩增出SRY条带，若待测样品中无此带，提示实验失败，需检查DNA抽提是否成功，或者扩增操作是否正确。阴性对照、空白对照没有上述对应的条带扩增，若出现小于100bp扩增，则为二聚体。正常对照每个反应出现4条带，如果与正常对照相比出现一个或者多个STS条带缺失，即可判断为其对应的STS缺失。
注：AZFc缺失是最常见的缺失类型。若AZFc区域的sY254和sY255出现单个缺失，通常是实验错误所致。如试剂设计不合理、标本保存或DNA抽提有问题。AZFa区域的两个STS位点出现单个缺失非常罕见，在排除实验操作失误后，判断为AZFa区域的部分缺失，但得出结论前应仔细复核。AZFb区域情况类同。

[备注]  此试剂盒仅供科研使用。